Toepassing van microarray-technologie

De constructie van cDNA-bibliotheken is nuttig om genexpressie in organismen onder verschillende omstandigheden te begrijpen, maar willekeurige sequenering van onbevooroordeelde cDNA's is bewerkelijk en geeft aanleiding tot redundantie. Wij wilden cDNA's isoleren die werden geïnduceerd door Aspergillus nidulans van glucose op geselecteerde polysacchariden om te schakelen. Wij ontwierpen een Negatieve Subtractie Hybridisatie methode waarbij een bibliotheek gemaakt van cDNAs van cellen gekweekt onder een geselecteerde fysiologische conditie met gelabelde cDNA probes van een andere fysiologische conditie wordt gescreend. In een screening voor transcripten geïnduceerd door het veranderen van de koolstofbron, werden 3.532 negatieven geïsoleerd. Single-channel microarray experimenten werden uitgevoerd om te bevestigen dat de meerderheid van de negatieven inderdaad differentieel geïnduceerd werden. Om inzicht te krijgen in de regulatie, gebruikten we microarrays om veranderingen in genexpressie te identificeren na een verschuiving van glucose naar pectine of glucosestervatie. De bevindingen van deze studie tonen het nuttige gebruik aan van de krachtige microarray-technologie om genexpressieprofilering onder verschillende fysiologische omstandigheden te bestuderen.