Purificación de la superóxido dismutasa a partir de un aislado bacteriano

Las células se cosecharon del cultivo bacteriano aislado por centrifugación y se suspendieron en tampón Tris-HCl de pH 8,0. La densidad óptica (D.O.) de las células se midió a 600 nm y cada vez se desbarataron células de 21,5 densidades ópticas (D.O.) y se utilizaron para la purificación de laenzima.Purificación de la superóxido dismutasa de SPB-13.Se utilizó el método de precipitación con sulfato de amonio para concentrar lasproteínas.Después, la enzima se purificó aún más mediante una columna de DEAE-Sefarosa. La columna de DEAE-sefarosa se cargó con 3 ml de proteína concentrada.La actividad enzimática se registró únicamente en las fracciones 22, 23, 24, 25, 26, 27 y 28. Estas fracciones se pollearon juntas. Se comprobó la pureza de las fracciones polleadas junto con la enzima cruda mediante SDS-PAGE.La actividad máxima de la superóxido dismutasa de SPB-13 se encontró en el tampón Tris-HCl, molaridad 60mM, pH 8,0, el tiempo de incubación fue de 2,0 minutos, la temperatura de incubación 450C. Se encontró que una concentración de enzima de 10µg era óptima. Se comprobó la termoestabilidad de la superóxido dismutasa y se encontró que la enzima era termoestable hasta550Cdurante 60 minutos.