Produzione di HFS da parte della glucosio isomerasi isolata da E.coli DH5 Alpha

La xilosio/glucosio isomerasi è un importante enzima industriale, utilizzato da decenni per la conversione del glucosio in fruttosio. Questa ricerca si concentra sulla produzione di isomerasi del glucosio da Escherichia coli DH5¿. Gli studi di ottimizzazione della fermentazione hanno mostrato che una maggiore quantità di estratto di lievito e di triptone ha aumentato la crescita cellulare e la temperatura ottimale per la crescita è stata di 37°C. La purificazione parziale della xilosio isomerasi è stata effettuata mediante trattamento termico e precipitazione con solfato di ammonio. L'80% del valore di cut off del sale ha prodotto la massima attività del concentrato enzimatico. La xilosio isomerasi ha mostrato la massima attività a 75 °C e a pH 8. L'attività enzimatica in condizioni ottimali è stata di 5,0 U/min/ml per E. coli DH5¿. L'aggiunta di ioni cobalto e xilosio ha aumentato l'attività di 10-20 volte. L'attività specifica per E. coli DH5¿ era di 60,5 nmol/min/mg di proteina. Solo l'8% del massimo sciroppo di D-fruttosio è stato prodotto utilizzando 100mM di D-glucosio come substrato dopo 14 giorni di incubazione. Pertanto, E. coli DH5¿ non è un candidato migliore per la produzione di sciroppo di fruttosio.