Producción de HFS por glucosa isomerasa aislada de E.coli DH5 Alpha

La xilosa/glucosa isomerasa es una importante enzima industrial que se utiliza desde hace décadas para la conversión de glucosa en fructosa. Esta investigación se centra en la producción de glucosa isomerasa a partir de Escherichia coli DH5¿. Los estudios de optimización de la fermentación mostraron que una mayor cantidad de extracto de levadura y triptona aumentaba el crecimiento celular y que la temperatura óptima para el crecimiento era de 37ºC. La purificación parcial de la xilosa isomerasa se llevó a cabo mediante tratamiento térmico y precipitación con sulfato amónico. El 80% del valor de corte de la sal produjo la máxima actividad del concentrado enzimático. La xilosa isomerasa mostró una actividad máxima a 75 °C de temperatura y pH 8. La actividad enzimática en condiciones óptimas fue de 5,0 U/min/ml para E. coli DH5¿. La adición de iones de cobalto y xilosa aumentó la actividad entre 10 y 20 veces. La actividad específica para E. coli DH5¿ fue de 60,5 nmol/min/mg de proteína. Sólo se produjo el 8% del jarabe de D-fructosa máximo utilizando 100mM de D-glucosa como sustrato tras 14 días de incubación. Por lo tanto, E. coli DH5¿ no es un mejor candidato para la producción de jarabe de alta fructosa.