Produção de HFS pela glucose isomerase isolada de E.coli DH5 Alpha

A xilose/glucose isomerase é uma enzima industrial importante, que tem sido utilizada para a conversão de glucose em frutose há décadas. Esta investigação centra-se na produção de glucose isomerase a partir de Escherichia coli DH5¿. Os estudos de otimização da fermentação mostraram que uma maior quantidade de extrato de levedura e de triptona aumentava o crescimento celular e que a temperatura óptima para o crescimento era de 37°C. A purificação parcial da xilose isomerase foi efectuada utilizando tratamento térmico e precipitação com sulfato de amónio. 80% do valor de corte do sal produziu uma atividade máxima para o concentrado enzimático. A xilose isomerase apresentou actividades máximas à temperatura de 75 °C e pH 8. A atividade enzimática em condições óptimas foi de 5,0 U/min/ml para E. coli DH5¿. A adição de iões de cobalto e xilose aumentou a atividade de 10 a 20 vezes. A atividade específica para E. coli DH5¿ foi de 60,5 nmol/min/mg de proteína. Apenas 8% do xarope de D-frutose máximo foi produzido utilizando 100 mM de D-glucose como substrato após 14 dias de incubação. Deste modo, a E. coli DH5¿ não é a melhor candidata para a produção de xarope de frutose elevado.