Los efectos tripanocidas de los anticuerpos contra la tubulina recombinante de T.brucei

T. b. Los genes de tubulina alfa y beta de brucei se expresaron en E. coli utilizando el plásmido de expresión pTrP2 y el ácido 3-¿-indoleacrílico como inductor. Las tubulinas expresadas se analizaron mediante SDS-PAGE y se confirmaron mediante transferencia Western, en la que tenían una masa molecular aparente idéntica de 50 kDa. Las tubulinas expresadas se disolvieron individualmente en urea 8 M y se diluyeron 20 veces, después de lo cual se concentraron y se dializaron extensamente contra tampón MES. Después de la diálisis, el rendimiento medio de tubulina alfa y beta fue de 0,7 g por litro de cultivo. Se produjeron anticuerpos policlonales en cada uno de los 56 conejos inmunizados con tres dosis de tubulinas concentradas a 150 ¿g o 450 ¿g por inmunización por animal. El efecto de estos anticuerpos sobre T. b. El crecimiento de brucei se estudió cultivando T. b. brucei en el torrente sanguíneo hasta en un 25% de los antisueros criados en conejos. Los antisueros de los otros conejos no inhibieron T. b. crecimiento de brucei en la cultura. Estos resultados muestran que los anticuerpos contra la tubulina tripanosómica expresada en bacterias pueden no ser citotóxicos para T. b. brucei.