Determinação da fração mutada de NPM1 na LMA por dPCR

A mutação do gene NPM1 (Nucleofosmina) é uma das mutações adquiridas mais frequentemente observadas na leucemia mieloide aguda (LMA). Dos vários tipos de mutações do NPM1, a mutação do tipo A representa 80%. A monitorização deste marcador é indicada por rotina no tratamento da LMA. Atualmente, é monitorizado por RT-qPCR. Os resultados são expressos como um rácio "mutado/normal" de mutantes NPM1 e requerem a utilização de um gene de referência. A PCR digital é uma tecnologia recente que permite a quantificação absoluta de um evento genético raro. Os pontos fortes da PCR digital são numerosos: o gene de referência é idêntico ao alvo de interesse, a sensibilidade é praticamente idêntica à da RT-qPCR e não há necessidade de utilizar ensaios com plasmídeos. Neste contexto, desenvolvemos um método de PCR digital para o biomarcador NPM1 tipo A, determinando os parâmetros óptimos da técnica para esta deteção. Em conclusão, a PCR digital parece ser uma ferramenta relevante para monitorizar a doença residual.