Extraction d'ADN à partir du tissu épithélial de limace

L'objectif de la recherche était de comparer trois protocoles : Extraction avec SDS ; Extraction avec CTAB et 2¿-mercaptoéthanol et Extraction avec SDS et protéinase K, afin de déterminer la méthode la plus appropriée pour obtenir de l'ADN de haut poids moléculaire et de grande pureté dans les tissus épithéliaux des limaces : Arion subfuscus et Deroceras reticulatum. La concentration et la pureté de l'ADN ont été estimées par spectrophotométrie (absorbance à 260 nm et rapport Abs260/Abs280 nm). Une conception complètement randomisée avec six répétitions a été utilisée. Des différences significatives (p<0,01) ont été détectées pour la quantité, la concentration et la pureté entre les protocoles. Le protocole (SDS et protéinase K) a permis d'obtenir un ADN de poids moléculaire plus élevé (2 514,90±291,56) et de pureté plus élevée (1,97±0,02). La qualité de l'ADN de chaque protocole a été vérifiée par PCR-RAPD, en observant une faible reproductibilité pour l'amorce OPA-02 (protocole SDS) ; tandis que dans les autres méthodes, des profils d'amplification à haute résolution et des bandes reproductibles ont été observés. Il est recommandé d'utiliser le protocole SDS et la protéinase K, pour obtenir un ADN génomique de poids moléculaire élevé, de qualité et de pureté dans les limaces.